Окраска бактерий по Граму

Клетки бактерий можно визуализировать и идентифицировать различными способами. Малые размеры, а также низкие величины оптической плотности и показателя преломления большинства прокариотических клеток делают их почти невидимыми в обычном световом микроскопе даже при большом увеличении. Наиболее давно применяемым и традиционным способом визуализации микроорганизмов служит окрашивание катионными и анионными красителями.

Датский бактериолог Грам в 1884 г. предложил использовать с этой целью основный краситель кристаллический фиолетовый (окраска бактерий по Граму). Метод окраски по Граму заключается в том, что разбавленный раствор красителя наносят на фиксированный препарат бактерий, после чего обрабатывают его раствором йода.

Кристаллический фиолетовый образует с йодом комплекс, умеренно растворимый в этаноле или ацетоне, но не растворимый в воде, что позволяет дифференцировать бактерии на «грамположительные» - их клетки удерживают комплекс йода с красителем и остаются темно-фиолетовыми – и «грамотрицательные», которые обесцвечиваются этанолом и могут быть затем дополнительно окрашены фуксином.

Комплекс красителя с йодом локализован, по-видимому, на плазматической мембране. «Положительная» окраска по Граму обусловлена тем, что клеточная стенка данных бактерий препятствует экстракции этого комплекса, тогда как у грамотрицательных бактерий клеточная стенка не обладает таким свойством. Окраска по Граму по-прежнему сохраняет свое значение в качестве важного таксономического признака, коррелирующего со многими другими свойствами бактерий.